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如何制備雙抗夾心法ELISA的質(zhì)控品
點(diǎn)擊次數(shù):76 更新時間:2025-12-03

在雙抗夾心法ELISA中,質(zhì)控品是確保檢測結(jié)果準(zhǔn)確性和可靠性的關(guān)鍵組成部分。它們通常作為已知濃度或狀態(tài)的樣本參與整個實(shí)驗(yàn)流程,用于監(jiān)控試劑性能和操作穩(wěn)定性。

雙抗夾心法ELISA質(zhì)控品制備需通過以下步驟實(shí)現(xiàn):

1.質(zhì)控品原料選擇

使用高純度目標(biāo)蛋白(如布魯氏菌4A12抗體)或滅活菌液(如志賀氏菌1×10^5 CFU/mL

需驗(yàn)證原料的穩(wěn)定性與活性,如納米抗體CPB-VHH半衰期2.152小時

2.質(zhì)控品制備流程

?稀釋體系?:采用PBS緩沖液或5%脫脂奶粉封閉液

?梯度稀釋?:標(biāo)準(zhǔn)品需進(jìn)行1:2,0001:60,000倍稀釋

?分裝保存?:-20℃凍存,避免反復(fù)凍融

3.質(zhì)控品驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)

?靈敏度?:zui低檢出限需達(dá)0.375 ng/mLPTL檢測)或2.56 pg/mL(肉毒毒素)

?精密度?:批內(nèi)/批間CV應(yīng)<10%

?特異性?:與近緣菌株無交叉反應(yīng)

4.操作注意事項(xiàng)

包被條件:4℃過夜,5%脫脂奶粉封閉2小時

檢測抗體:HRP標(biāo)記抗體稀釋1:2,000

顯色時間:15分鐘(PTL檢測)或20分鐘(肺炎支原體)

質(zhì)控品的作用與類型

根據(jù)免疫測定的通用原則,質(zhì)控品主要分為以下兩類:

陽性對照:

作用:評判當(dāng)次檢測的準(zhǔn)確性與有效性。

常見形式:含有已知濃度目標(biāo)抗原的標(biāo)準(zhǔn)品溶液,或經(jīng)驗(yàn)證為陽性的生物樣本(如血清)。

陰性對照:

作用:檢測是否存在非特異性結(jié)合或污染,避免假陽性。

常見形式:空白孔(只加稀釋液)、不含目標(biāo)抗原的緩沖液,或已知不含有受檢物質(zhì)的樣本。

一個可靠的ELISA實(shí)驗(yàn)必須設(shè)置陽性及陰性對照來評估試劑盒和檢測過程的客觀性與可信性。商業(yè)化的ELISA試劑盒通常會直接提供這些質(zhì)控品。